Spinning disk confocal
Technik
Der Unterschied zwischen einem Point Scanning Confocal und einem Spinning Disk Mikroskop liegt bei der Anzahl an Bildpunkten, die zur gleichen Zeit gemacht werden. Während ein Point Scanning confocal Mikroskop Stück für Stück Bilder macht, fotografiert ein Spinning Disk Confocal Mikroskop 1000 Stellen parallel und erfasst emittiertes Licht mittels Kamera. Der Vorteil bei dieser Vorgehensweise ist eine schnellere Bildaufnahme und eine Reduzierung der Spitzenleistung an einer beleuchteten Stelle. Letzteres ist wichtig für das Überleben der Zellen während Lebendzellexperimenten. Die Aufnahme von vielen konfokalen Stellen zur gleichen Zeit hat jedoch den Nachteil Schnittqualität zu verlieren. Mit zunehmender Dichte der konfokalen Stellen steigt die Wahrscheinlichkeit, dass Photonen, die von einem bestimmten Fokuspunkt emittiert werden, durch die Blende eines benachbarten Punkts detektiert werden.
Nutzung
Die konfokal Technik wird für die Untersuchung von fluoreszierenden lebenden Zellen eingesetzt. Kinetische Studien sind aufgrund der Gewschindigkeit dieser Technik möglich. Je nach Konfiguration des Geräts können auch Mikroirridationsstudien für Photoaktivierung oder -inaktivierung gemacht werden.
Konfiguration
Microscope:
Invers Nikon TiE
Focus hold system:
Ti-ND6-PFS-S Perfect Focus System
Transmittance illumination:
LED 100 coolwhite (can be triggered)
Stage:
Multiwell plate, 35 mm dish and slide format
200 µm z-focus Piezo nano drive
Environmental control:
Large Cage incubator CO2, humidity, heating
Objectives:
CFI P-Achromat 10X/ 0.25/
CFI Apo LWD 40x WI Lambda-S/ 1.15*
CFI P-Apo 40x Lambda/ 0.95*
CFI Apochromat TIRF 60x Öl/ 1.49/*
CFI P-Apo 100x Lambda Öl/ 1.45*
*Differential Interference Contrast (DIC) available
Laser light source:
Andor laser line combiner
Diode 405 nm
DPSS 488 nm
DPSS 561 nm
Diode 638 nm
Spinning disk confocal unit:
Yokogawa W1 spinning disk unit
50 µm disk pattern
Beamsplitter:
Quad band dichroic mirror 405/488/561/640
Pass 400-410, 483-493,557-563,633-643; Reflection 425-470,505-542,578-623, 660-750
Triple band dichroic mirror 445/515/594
Pass 440-450, 513-517,592-596; Reflection 463-497, 532-575, 613-750
Emission Filter:
Multi band
Semrock Brightline, Triple Band Fluorescence Filter, 440-40 / 521-21 / 607-34 / 700-45
Single band
525/50 nm
540/30 nm
600/50 nm
700/75 nm
Polarizer
Borrealis for homogenous illumination
Light stimulation and bleaching (FRAP, FLIP, photactivation)
Frappa with 70:30 quad dichroic 405/488/561/640
Camera:
ANDOR iXon DU-888U3-CS0-BV EMCCD camera
1024 x 1024 pixel
Pixel size 13 x 13 µm
QE >90%
Peltier cooling -85 °C
TIRF:
Nikon TIRF condenser with one motorized axis
Widefield Epifluorescence:
Light source:
LUMENCOR SOLA SE II
Filtercube: (HC BrightLine)
DAPI (ex 390/18; dm 416, em 460/60)
eGFP (ex 469/35, dm 497, em 525/39)
Cy3.5 (ex 565/24, dm 585, em 620/52
Software:
NIS elements
JOBS
Real Time Aquisition
Computer:
Xeon 6Core Prozessor
32 GB RAM
nVidia Quadro K2200 graphic card
512 GB SSD
4 TB SATA Festplatte